3.3.7 扩增外源基因中酶的选择 82-83

　　3.4 本章小结 83-84

　　第四章 矮牵牛转化及转化子鉴定 84-102

　　4.1 材料与方法 84-90

　　4.1.1 材料 84

　　4.1.2 试剂与引物 84

　　4.1.3 方法 84-90

　　4.2 结果与分析 90-99

　　4.2.1 受体材料生物学特征 90-91

　　4.2.2 矮牵牛种子无菌萌发 91

　　4.2.3 矮牵牛卡那霉素选择压的确定 91-93

　　4.2.4 农杆菌介导的叶盘法转化矮牵牛 93-95

　　4.2.5 炼苗成活率影响因素 95-97

　　4.2.6 转化植株的检测鉴定 97-99

　　4.3 讨论 99-101

　　4.3.1 共培养后 MS 液体培养基振荡抑菌对外植体活力的影响 99-100

　　4.3.2 适宜的抗生素种类筛选 100

　　4.3.3 适宜的头孢霉素浓度 100

　　4.3.4 延迟培养对转化的影响 100

　　4.3.5 生根培养中的筛选剂添加的必要性 100-101

　　4.4 本章小结 101-102

　　第五章 转化子表型观察及表达测定 102-130

　　5.1 材料与方法 102-103

　　5.1.1 DFR 基因表达相对定量测定 102

　　5.1.2 DFR 酶活性测定 102

　　5.1.3 转化子花色素苷含量的测定 102-103

　　5.2 结果与分析 103-122

　　5.2.1 DFR 表达相对定量检测标准曲线绘制 103-105

　　5.2.2 ‘9702’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 105-116

　　5.2.3 ‘Lx’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 116-119

　　5.2.4 ‘2512’转入不同基因表型及表达分析 119-121

　　5.2.5 ‘W115’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 121-122

　　5.3 讨论 122-127

　　5.3.1 不同来源 DFR 对矮牵牛花色的影响 122-123

　　5.3.2 外源基因在矮牵牛的表达不同的可能原因 123-124

　　5.3.3 ‘LH26’表型的可能原因 124

　　5.3.4 飞燕草色素的 UPLC 检测 124-125

　　5.3.5 UPLC 检测单一花青素苷标准品的可能性 125

　　5.3.6 外源基因拷贝数对花色的影响 125

　　5.3.7 DFR mRNA 相对浓度与外源基因拷贝数的关系 125

　　5.3.8 调节基因 AN2 对花色的影响 125-126

　　5.3.9 花药中 DFR 基因的表达 126

　　5.3.10 DFR 酶活性与花青素苷含量相关性分析 126-127

　　5.4 本章小结 127-130

　　第六章 转化子遗传稳定性观测 130-134

　　6.1 材料与方法 130

　　6.2 结果与分析 130-132

　　6.2.1 转基因矮牵牛 T1 代生物学表型 130-132

　　6.2.2 PCR 检测结果 132

　　6.3 讨论 132-133

　　6.3.1 T1 代种子发芽率低的可能原因 132-133

　　6.3.2 T1 代种子性状分离的原因 133

　　6.4 本章小结 133-134

　　第七章 本文总结 134-139

　　7.1 研究的主要结论 134-136

　　7.2 研究的创新点 136

　　7.3 研究中发现的问题 136-137

　　7.4 今后工作展望 137-139

　　附录 139-151

　　附录1：符号说明 139-140

　　附录2：本研究中使用的主要仪器设备 140-142

　　附录3：分离的 DFR 序列 142-151

　　参考文献 151-163

　　致谢 163-165

　　攻读博士学位期间已发表或录用的论文 165