抗坏血酸( AA) 、人血清白蛋白( HSA) 购于美国 Sigma-Aldrich 公司; 多巴胺( DA) 购于 AlfaAesar 公司; D-色氨酸 ( D-Trp) 、DL-苏氨酸 ( DL-Thr) 、L-α-丙氨酸 ( L-α-Ala) 、L-组氨酸 ( L-His) 、D-丝氨酸 ( D-Ser) 、L-赖氨酸 ( L-Lys) 、L-亮氨酸( L-Leu) 、L-苯丙氨酸( L-Phe) 由中国医药( 集团)上海化学试剂公司提供; 尿酸( UA) 购于上海生工生物有限公司; 半乳糖( Gal) 、果糖( Fru) 、甘露糖( Man) 购于比利时 Acros Organics 公司; 柠檬酸购于广州化学试剂厂。
实验所用其他化学试剂均为国产分析纯，实验用水为 18.2 MΩ·cm 的超纯水。
实验所用的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液( 1.0 ×10- 2mol / L,pH 4.0 ~ 7.5) : 称取 0.78 g NaH2PO4·2H2O,溶于 450 mL 超纯水中，定容至 500 mL,用H3PO4和 NaOH 溶液调节 pH 值。
2.2 人血清样品的预处理。
人血清样品取自桂林市第五人民医院。取200 μL 人血清，置于 1.5 mL 离心管中，加入 400μL 乙腈，漩涡震荡混合 5 min,在高速冷冻离心机上以 1.2 ×104r / min 的速度离心 20 min,取上层清液，用氮气吹干，残留物用 1 000 μL 超纯水溶解，试液置于冰箱中 4 ℃保存备用。
2.3 GQDs 的合成。
GQDs 的合成方法参照文献[33].称取 2.0g 柠檬酸加入试管中，加热至 200 ℃ ,当柠檬酸全部融化后开始计时。20 min 后，溶液颜色变为橘红色。在磁力搅拌作用下，将橘红色液体用滴管逐滴加入 100 mL 含 10 mg NaOH 的溶液中，用HCl 调节 pH 至 7.0,得到 GQDs 水溶液，浓度为14 mg / mL,于 4 ℃ 下避光保存。
2.4 实验方法。
在一系列0.6 mL 的离心管中，依次加入10 μL1.4 mg / mL GQDs、10 μL 不同浓度的 AA 以及 80 μLpH =4.5 的磷酸盐缓冲液，充分混匀后，在 37 ℃ 下孵育4 h.冷却后，采用 LS-55 型发光光度计( Per-kin-Elmer,USA) 记录样品在 453 nm 处的荧光强度，设置电压为750 V,激发、发射狭缝宽度均为15 nm,扫描速度为1 000 nm/min,激发波长为367 nm.
3、结果与讨论。
3.1 GQDs 的表征。
所合成的. GQDs 的透射电子显微镜和原子力显微镜图像、红外光谱、紫外吸收光谱和荧光光谱均参见文献[34].本实验合成的 GQDs 的粒径为17 ~21nm,平均厚度为 1.5 nm.GQDs 表面存在羧基和羟基，这些官能团赋予了 GQDs 优良的水溶性。GQDs在紫外区有较强的吸收，在 360 nm 处有一吸收峰，并且在 365 nm 紫外灯照射下可观察到蓝色荧光。GQDs 具有对称的激发和发射光谱，其最大激发波长为367 nm,最大发射峰波长为453 nm.
3.2 荧光猝灭机理。
GQDs 的荧光猝灭机理。GQDs本身在激发光照射下发出蓝色荧光。已有研究证明，氧化石墨烯( Graphene oxide,GO) 能被 AA 还原[35].因为本实验合成的 GQDs 表面带有-COOH,与 GO 具有相似的表面基团，因此加入 AA后，AA 与 GQDs 发生氧化还原反应，AA 被氧化为脱氢 抗 坏 血 酸 ( dehydro-AA) 并 转 移 电 子 给GQDs,GQDs 的荧光被猝灭。
3.2.1 紫外吸收光谱。
猝灭机理也可通过紫外光谱来证明。加入 AA 后，GQDs 在 360 nm 处的特征峰消失，说明 GQDs 与 AA 反应生成了其他物质。
3.2.2 荧光寿命。
为了进一步证实 AA 对 GQDs 的猝灭机理，实验测定了体系的荧光寿命是 AA 加入前后 GQDs 的荧光衰减曲线。
表 1 是 GQDs 猝灭前后的荧光寿命值。从表中可以看到，AA 加入前后，体系的荧光寿命发生了明显变化，说明猝灭过程是动态猝灭[36-37].动态猝灭是碰撞过程，因此 AA 猝灭 GQDs 的荧光机理可解释如下：
GQDs + h ν →* GQDs + AA→[* GQDs…AA]( 碰撞复合物 )→GQDs-+ AA+( 还原态的电子转移)[38]
激发态分子* GQDs 遇到AA,两者相互作用导致电子和能量的转移，最终导致* GQDs 的荧光猝灭。
3.3 可行性验证。
为了考察本方案的可行性，我们对 GQDs 与AA 反应前后的样品溶液进行了荧光光谱扫描。AA 加入后，GQDs 在 453 nm 的荧光强度降低，荧光被猝灭了 79.6%,说明该方法能用于 AA 的检测。
3.4 AA 与 GQDs 作用时间的优化。
实验考察了 AA 加入后，GQDs 溶液的荧光强度随时间的变化。见，体系的荧光强度随时间的延长而逐渐下降，在大约4h 以后，荧光强度降低速度减慢，之后荧光强度变化不大。为了保证测定的灵敏度同时缩短分析时间，实验选择4 h 作为 AA 与 GQDs 的作用时间。
3.5 pH 值的优化。
