2．2．3 标准曲线的测定分别精密吸取GPC对照品储备液1、2、3、5、10、20 mL，置于100 mL容量瓶中，用流动相定容后，摇匀。精密量取20 L进样，记录色谱峰面积。对进样浓度(mg·L )和峰面积分别取对数，然后以浓度的对数lnC对甘油磷酸胆碱峰面积的对数y进行线性回归，求得标准曲线方程为：Y=0．538 1lnC一8．722，R =0．999，线性范围为100—2 000 mg·L～。实验结果见图1。
通过图1可以看出，硅胶柱层析后GPC在图谱上表现为单峰。无论是从外观上还是从HPLC谱图上分析，都可以得出结论：通过硅胶柱层析能够得到GPC纯品。
2．2．4 样品含量测定方法 精密称取经过分离纯化的GPC适量，用流动相溶解后，转移至100 mL容量瓶中定容，得到约10 g·L 的溶液。精密量取该溶液5 mL，置于100 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。精密量取20 L进样，记录色谱峰面积，并采用外标两点对数法计算样品含量。
2．2．5 回收率试验分别精密吸取对照品储备液3、10 mL，置于100 mL容量瓶中，用流动相定容后，摇匀，作为对照品溶液。精密称取分离纯化的GPC(批号100301)适量，用流动相溶解，分别制成约含GPC 0．4、0．5、0．6 g·L 的溶液各3份。精密量取20 L进样，记录色谱峰面积。采用外标两点对数法计算含量，并求得回收率。
平均回收率为99．81％ ；RSD=0．85％(n=9)。
2．2．6 精密度试验对照品溶液取“2．2．5”项下的对照品溶液。精密称取分离纯化的GPC产品(批号100301)适量，用流动相溶解，制成约含GPC 0．5g·L 的溶液。精密量取20 L进样，进样6次，记录色谱峰面积。采用外标两点对数法计算样品含量，并计算相对标准偏差。结果测得GPC的含量分另0为：99．02％ 、99．67％ 、100．14％ 、100．18％ 、99．28％ 、99．95％ ，平均含量为99．7l％ ，RSD =0．48％ (n=6)。
2．2．7 强光照射试验 取分离纯化的GPC(批号100301)3份，编号为100301—1、100301—2、100301—3，分别平铺在培养皿中，使其厚度≤5mm，置于澄明度测定仪下(光线强度为4 500 LX)10 d，于第5、10天取样，与第0天的含量比较，考察其含量变化。平均含量为99．51％；RSD=0．40％(凡=9)，结果表明含量无明显变化，即GPC对光比较稳定。
2．2．8 高温试验 取分离纯化的GPC(批号100301)3份，编号为100301—1、100301—2、100301— 3，分别平铺在培养皿中，使其厚度≤5 mm，在60℃下放置10 d，于第5、1O天取样，与第0天的含量比较，考察其含量变化。计算平均含量为99．65％ ，RSD为0．42％(n=9)，结果说明含量无明显变化，表明GPC原料药对热比较稳定。
2．2．9 高湿试验取分离纯化的GPC(批号100301)三份，编号为100301—1、100301—2、100301—3，分别平铺在培养皿中，使其厚度≤5mm，在25℃于相对湿度75％ 条件下放置10 d，于第5、l0天取样，与第0天的含量比较，考察其含量变化。试验结果：平均含量为99．30％ ，RSD为0．47％(n=9)，表明GPC对湿比较稳定。
2．2．1O 加速试验分别取GPC(批号为100301、100302、100303)各一份，在密闭器皿中于40~C、相对湿度75％ 的条件下放置6个月，于第1、2、3、6个月月末取样，与第0个月的含量比较，考察其含量的变化。计算含量平均值为99．6l％，RSD 为0．57％(n=15)，结果含量无明显变化，表明GPC比较稳定。试验结果见表5。
2．2．11 长期试验分别取GPC(批号为100301、100302、100303)各一份，在密闭器皿中于25℃ ，相对湿度60％的条件下放置12个月，于第3、6、9、12个月月末取样，与第0个月的'含量比较，考察其含量的变化。平均含量为99．12％ ，RSD为0．50％(t= 15)，即含量无明显变化，表明GPC化学性质和物理性质比较稳定。试验结果见表6。
2．2．12 重复性试验取配制5份浓度为0．5 g·L 的GPC供试品溶液，按“2．2．4”项下色谱条件进行测定，按照上述含量测定方法，测得5份GPC供试品的含量分别为99．83％ 、100．11％ 、99．92％ 、98．57％ 、99．98％ ，计算RSD为0．63％ 。结果表明本法测定的重复性良好。
3 讨论试验结果表明，通过三氧化二铝脱色法和硅胶柱层析法相结合的工艺对甘油磷酸胆碱进行分离纯化，能够得到含量达99．5％ 以上的产品。该分离纯化工艺简单，可操作性强，适用于工业化生产。
采用美国Alltech20xx型蒸发光散射检测器，使用高效液相色谱法研究甘油磷酸胆碱的稳定性，根据检测结果，GPC色谱峰的理论塔板数均在3000以上。
