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  百合知母汤终浓度为2.2g/Kg/d(成人日用量30g)

  氟西汀终浓度为1.8mg/kg/d(成人日用量20mg)

  各组按浓度给药28天,对照组给等体积的三蒸水。

  3.CUMS抑郁症模型大鼠制备

  除正常对照组外,其余动物采用慢性轻度不可预见性温和刺激结合孤养(CUMS)的造模方法:各造模组大鼠均单笼饲养,刺激因子包括禁食、禁水、4℃冰水游泳、夹尾、晃尾、潮湿垫料和倾斜45°、束缚应激、陌生物品、空笼刺激、噪音刺激、闪光刺激、水平震荡、昼夜颠倒等。每日随机给予2到3种刺激,使大鼠不能预料刺激的发生以避免产生适应。每种刺激交叉累计使用2—3次,持续21天,造模成功后,给药期间继续维持造模。建立慢性温和不可预见性应激结合孤养(CUMS)抑郁症大鼠模型,具体操作方法如下:

  (1)禁水:即24小时不予供水。具体方法为,造模当天,上午8:00始,撤出大鼠笼内供水瓶,禁水24小时后,于次日上午8:00正常供水。

  (2)禁食:即24小时禁止进食。具体方法为,造模当天上午8:00始,清除鼠笼内所有鼠粮,剥夺进食24小时后,禁食期间供水正常。禁食后给少量碎食,然后正常词养。

  (3)昼夜颠倒:造模当天,上午8:00,将正常对照组大鼠转移至其它SPF级实验室后,关闭本实验室所有电源,模仿黑夜,至20:00准时打开实验室电源,模仿白昼,给大鼠制造昼夜颠倒的假象。

  (4)夹尾:用缠裹有胶布的塑料夹,夹持鼠尾根部,时长为5min。

  (5)晃尾:提住大鼠尾巴中部以每秒钟1次的频率,晃尾15分钟,晃尾时力度要轻柔,避免牵拉大鼠尾尖部位,以防脱皮

  (6)冰水游泳:取一直径为30cm玻璃缸,注入适量清水后加入适量冰块,调整水温至4℃(根据天气情况,适当调整,以防冻伤),同时调整水液平面据器皿边缘约15—20cm,然后将大鼠放入冰水中,强迫其游泳5min。5min后将大鼠榜出,先用干毛巾擦拭动物毛发,然后用吹风机吹干,避免感冒。每次冰水游泳结束后需捞干净游泳器皿内大鼠类便,避免对下一只鼠产生影响。

  (7)高速水平震荡:将动物放入空的鼠笼中,进行人工振荡,2 次/秒,有效节奏连续持续5min;或者水平晃动,1次/秒,持续30分钟

  (8)噪音刺激:90分贝噪音刺激2h,尽量选在白天大鼠休息的时候给予此种刺激。

  (9)束缚刺激:将大鼠束缚于500ml烧杯中2h,注意保持通气。

  (10)潮湿环境:将大鼠的垫料换以潮湿垫料,持续刺激12h。

  (11)异物刺激:往大鼠笼内放置金属条棒,钝性玻璃器皿的异物予以刺激,持续2h。

  (12)空 笼:撤掉大鼠笼里面的垫料笼子里不放置任何物品,持续12h。

  (13)倾斜刺激,:该刺激因素通常在禁水后进行,应激动物本身饥渴,在倾斜的鼠笼中觅食觅水更为困难。

  (14)闪光刺激:LED频闪灯,频闪频率2次/s,持续刺激2h。

  以上各种刺激的实施顺序遵循由弱(轻刺激,如昼夜颠倒、禁水禁食、潮湿环境)到强(重刺激,如冰水游泳,夹尾,晃尾,束缚刺激,噪音,闪光等刺激)的原则,以避免刺激之间的交互作用。每日采用1种刺激,平均每种刺激被采用2—3次,同种刺激不能连续出现,使动物不能预料刺激的发生。

  4.行为学指标的测量

  主要包括 1%蔗糖水消耗率、体重变化率、敞箱实验、Morris 水迷宫实验

  4.1体重变化率

  分别在实验的第 1d、15d、22d、29、36d 、43d、50d、57、64d进行。动物体重变化率(%)=(当日测量的体重—第1天的体重)/第1天的体重。

  4.2糖水消耗实验

  实验前期准备,在安静的环境内训练动物适应含糖饮水:第一个24h,每笼同时放置两个完全相同的动物水瓶,两瓶均为同等重量的1%蔗糖水;第二个24 h, 一瓶为1%鹿糖水,一瓶为相同重量的纯净水。然后进入实验阶段,禁水禁食24h后,测定9p。m—7a。m 10小时内大鼠1%蔗糖水摄入量。糖水偏爱率% =糖水消耗量/(糖水消耗量+清水消耗量)X100%。适养期间进行三次糖水偏爱筛选,将糖水偏爱率异常的大鼠剔除,不用于正式实验(三次糖水偏爱测试中均只喝自来水的大鼠为异常大鼠)。测定动物在实验第1天、第22天、第49天、第64天糖水偏爱率的变化。

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