1.2.5 生根培养 选择优选的壮苗培养基对矮生沿阶草的幼苗进行壮苗培养后，把健壮的矮生沿阶草无根幼苗转移到生根培养基上培养（表4）。每种生根培养基配方接种12瓶，每瓶接种5株生长一致的幼苗，培养条件同上。3周后观察幼苗根系生长情况。

　　2.结果与分析

　　2.1 愈伤组织的诱导

　　不同的愈伤组织诱导培养基上的产生的愈伤组织有所不同（表1）。几种培养基中，配方5和配方2的愈伤组织诱导率较高，分别为99%和96%，愈伤组织均表现为致密、淡黄色。其余配方的愈伤组织诱导率较低，为52%～74%，且诱导出的愈伤组织外观表现不良，黄色或褐色，严重影响不定芽的分化。综上所述，通过适宜的培养基配方可以使矮生沿阶草幼嫩茎尖诱导出大量的愈伤组织，且愈伤组织外观表现良好，诱导矮生沿阶草愈伤组织适宜的培养基配方为MS+0.1 mg/L BA+0.1 mg/L KT+1.0 mg/L NAA或MS+0.2 mg/L BA+0.05 mg/L KT+1.0 mg/L NAA，愈伤组织诱导率96%以上，且外观表现良好。

　　2.2 分化培养

　　不同的培养基对愈伤组织进行培养，分化出的不定芽有所不同（表2）。几种培养基中，配方3的分化率最高，达到92%；其次是配方6和配方5，分化率分别为88%和86%；且3种培养基分化出的不定芽高度和长势无明显差异，高度为0.5～0.6 cm，生长健壮。其余配方的分化率较低，生长一般。因此，适宜的培养基可以使愈伤组织分化出较多的不定芽，通过本研究可判定，矮生沿阶草愈伤组织分化出较多不定芽的培养基为MS+2.5 mg/L BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L NAA或MS+3.0 mg/L BA+0.05 mg/L KT+0.1 mg/L NAA或 MS+2.0 mg/L BA+0.1 mg/L KT+0.1 mg/L NAA。在优选的分化培养基上培养60 d，将高0.5 cm以上的不定芽从基部剪下，接种至相同的培养基上进行不定芽分化继代培养。每50 d继代1次，继代培养4代后不定芽达到6～7倍，进行壮苗培养。观察发现，继代培养分化的不定芽长势与愈伤组织分化的不定芽基本一致。endprint

　　2.3 壮苗培养

　　不定芽接种于不同的壮苗培养基上表现有所不同（表3）。配方3和配方4幼苗生长最好，高度分别达2.8、2.6 cm，且健壮、色泽深绿色；其次是配方7和配方8，幼苗高度分别为2.0、1.9 cm，但幼苗表现为淡绿色，生长一般；配方5和配方6的幼苗生长最差，高度分别为1.6、1.4 cm，外观表现为细弱、幼嫩，色泽黄绿色或淡绿色。综上所述，适宜的壮苗培养基可以使矮生沿阶草的不定芽变成健壮、且色泽好的幼苗，由本研究可知，矮生沿阶草适宜的壮苗培养基为MS+2.5 mg/L BA+0.1～0.2 mg/L NAA。

　　2.4 生根培养

　　把健壮的`矮生沿阶草无根幼苗转移至生根培养基上进行培养（表4）。运用配方5对幼苗进行生根培养时，根系生长最好，长度达1.8 cm，外观表现为健壮、白色，且平均根数达到5.7条/株；其次是配方4，根系长度为1.5 cm，外观表现为较健壮、淡黄色，平均根数为2.8根/株；其他配方的培养出的组培苗根系长度较短，生长一般、色泽淡黄色或黄褐色。矮生沿阶草根系生长的好坏直接影响组培苗移栽成活率的高低，应选择健壮、长度长、具有白色根系的组培苗进行栽培。综上所述，适宜的生根培养基利于矮生沿阶草的幼苗根系的萌发和生长，由本研究可知，矮生沿阶草适宜的生根培养基为1/4MS+0.2 mg/L NAA。

　　3.讨论与结论

　　关于沿阶草属组培方面的研究较多，其中以叶片为外植体诱导愈伤组织者居多，以茎尖为外植体诱导愈伤者的较少。目前，仅有别运清等[8]、郑志仁等[9]分别以湖北麦冬的莖尖和黑麦冬带茎尖的幼嫩茎段为外植体的报道。本研究以矮生沿阶草的幼嫩茎尖为外植体，为沿阶草属植物的茎尖离体培养提供一定的依据。

　　不同的植物器官诱导愈伤组织，其培养基有所不同。以叶片为外植体筛选诱导愈伤组织的培养基的研究中，日本矮生沿阶草的培养基是MS+1.0 mg/L 2，4-D+0.25 mg/L KT+0.1 mg/L NAA[3]，山麦冬理想的培养基是MS+1.5 mg/L 2，4-D+0.4 mg/L BA+1.0 mg/L NAA[10]。以茎尖为外植体筛选诱导愈伤组织的培养基的研究中，湖北麦冬在MS+2.0 mg/L BA+0.2～0.5 mg/L NAA的培养基中能完成愈伤组织的诱导[8]，黑麦冬诱导愈伤组织的培养基[9]与湖北麦冬的相似。这些研究表明植物器官诱导愈伤组织需要细胞分裂素和生长素共同作用，且二者比例应适当，本研究得出了与此一致的结论，发现矮生沿阶草茎尖愈伤组织的诱导需要细胞分裂素（BA和KT）和生长素（NAA）的共同作用，二者的比例为0.2～0.25 ∶ 1.0，即需要较低含量的细胞分裂素和较高含量的生长素。本研究以茎尖为外植体诱导愈伤组织，适宜的培养基为MS+0.1 mg/L BA+0.1 mg/L KT+1.0 mg/L NAA或MS+0.2 mg/L BA+0.05 mg/L KT+1.0 mg/L NAA，与别运清等的研究结果[8-9]有一定的差异，这可能是植物材料本身造成的，本研究采用的是矮生沿阶草，而后者采用的是湖北麦冬和黑麦冬。