抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响
背景与意义
炎症性肠病(IBD,Inflammatory bowel disease)是一组原因未明的慢性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(UC,ulcerative colitis)和克罗恩病(CD,Crohn’s disease)。
大约10%的结肠炎症尚不能区分是CD或UC,在西方国家称为不明确的结肠炎。
有专业医学调查机构经过随访跟踪研究,发现这些不明确结肠炎患者大多数发展称为UC,其临床症状多样化,但以腹痛、腹泻为主要肠道症状,病变可累及胃肠道任一部位,但结肠被侵犯最多。
随着我国人民生活水平的不断提高,人民的生活习惯出现了质的变化,快速的生活节奏成为现今社会的主旋律,然而我国炎症性肠病病人近年来的发病率亦不断上升,但正因此溃疡性结肠炎是一种原因未明的结直肠炎性病变,随着病程延长,倘若得不到针对性的治疗,病程会不断的'加重,且癌变风险也随之增加。
但目前由于溃疡性结肠炎临床病例积累需较长的时间,存在一定难度,建立溃疡性结肠炎的动物模型起到了重要作用。
目前关于溃疡性结肠炎动物模型较多,近年来,有研究者发现,使用TNBS诱发溃殇性结肠炎动物模型,造模成功率高,而且造模成功的动物模型出现自愈的现象低,动物模型的病症症状与人类症状相似。
通常情况下,TNBS用量为100~150 mg/kg体重,浓度在50%以上的乙醇为4~5ml/kg体重。
采用本方法复制的模型,动物结肠炎症和溃殇至少维持7~8周。
其中,1~3周为急性期改变,以中性粒细胞浸润为主;4~8周为慢性炎症改变,浸润细胞主要为淋巴细胞和浆细胞。
病理改变主要表现为结肠组织溃殇形成,肠壁增厚,教膜及黠膜下层大量炎症细胞浸润,肉芽组织及隐窝版肿形成。
在检测项目中,本模型采用的中性粒细胞髓过氧化物酶MPO是近年来临床广泛采用的一种诊断指标。
在急性炎症期,肠壁主要为中性粒细胞浸润,故MPO活性增加;炎症向慢性转化后,则以淋巴细胞浸润为主,MPO活性即明显下降活性与结肠急性炎症的严重程度呈正相关,是评价急性期严重程度及鉴别急、慢性炎症的重要指标之一。
在第一阶段的动物造模成功后,论文实验的第二阶段就是药物治疗阶段。
本论文实验选择治疗溃疡性结肠炎模型动物的药物是受试物A,对肠壁的炎症有显著的抑制作用,但是,因为专利版权等因素,抗炎受试物A的相关信息不可公布。
研究目的
本论文研究中,我们通过注射100mg/kg体重的TNBS乙醇溶液建立溃疡性结肠炎的动物模型,然后对造模成功的动物进行抗炎受试物的治疗,得到相关的数据结论,并初步探究溃疡性结肠炎相关病症症状及发病机制,与抗炎受试物对溃疡性结肠炎治疗机制情况,以此为探究人类溃疡性结肠炎发病机制与治疗机制提供一定的线索。
方案与材料
本论文选择50只,180~200g SD雄性大鼠,使用TNBS乙醇溶液灌肠复制溃疡性结肠炎模型。
将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,受试物低、高剂量组,阳性对照组,10只/组,灌胃给药,1次/d,连续10 d。
取结肠组织进行MPO和病理检测。
实验全过程与SPF级动物房中进行,所有实验环境与实验工具经过严格消毒使用,相关动物实验操作经过相关资质人员培训并通过测试,并且符合国家相关标准,这些实验条件由广东省医学实验动物心提供。
实验过程中,每天记录大鼠体重、皮毛、精神状态、排便情况及相关日常观察。
实验结束前一天动物禁食12h,不禁水。
处死大鼠,截取自肛门向上10 cm的结肠,沿肠系膜纵轴剪开,用冰生理盐水反复冲洗干净,取一小部分肉眼观察病变明显的部位以福而马林固定,进行组织病理学检查,另取一小部分肉眼病变明显的部位—80℃冻存,每组随机抽取6只动物的标本,检测各结肠组织MPO的变化。
时间内容备注
20xx年07月20日~20xx年08月19日资料积累、实验方案编写方案编写阶段
20xx年08月20日接收动物、编号、称重造模阶段
20xx年08月20日~20xx年08月22日检疫观察
20xx年08月23日称重,禁食