1 化合物的合成

　　1.1 化合物1～3 的合成 (以1 合成为例)

　　取5.94 g(30 mmol) 6-氯硫色满-4-酮置于250 mL 圆底烧瓶中,加入冰醋酸30 mL 使之完全溶解, 取5.21 g (33 mmol)液溴置于加有适量冰醋酸的恒压漏斗中。温度控制在40 ℃, 将溴的冰醋酸溶液缓慢滴加到上述圆底烧瓶中, 控制滴加速度 (每分钟20 滴), 50～60 min 滴加完毕, 继续在40 ℃下反应3～4 h。反应完毕后静置,冷却至室温。向上述体系中加入饱和亚硫酸氢钠溶液,有大量絮状沉淀析出, 抽滤, 滤饼用大量水洗至中性。室温干燥后得到淡黄色固体3-溴-6-氯硫色满-4-酮。取3.04 g (40 mmol) 硫脲置于250 mL 圆底烧瓶中, 加入70 mL 无水乙醇, 加热回流。待硫脲完全溶解后, 取5.52 g (20 mmol) 3-溴-6-氯硫色满-4-酮, 分批加入反应体系中, 反应1 h 后停止反应, 静置冷却。减压下旋干溶剂, 向残余物中加入饱和碳酸氢钠溶液, 至pH 值为8～9, 然后用二氯甲烷萃取3～4 次,合并有机相。减压下旋干有机溶剂, 剩余物经硅胶色谱柱 (洗脱剂为乙酸乙酯与石油醚, 体积比1∶2) 分离纯化得到黄色固体3.04 g。用类似的方法得到化合物2、3, 物理和光谱数据。

　　1.2 化合物4～12 的合成 (以4 合成为例)

　　取2.58 g(10 mmol) 2-[4-(2-溴乙氧基)苯基]乙酸和3.04 g (12mmol) 的1 溶于50 mL 二氯甲烷中, 然后加入3.85 g(12 mmol) TBTU, 常温下反应过夜。反应完后将体系中的溶剂旋干, 剩余物经硅胶色谱柱 (洗脱剂为乙酸乙酯与石油醚, 体积比1∶4) 分离纯化得到黄色固体3.80 g。用类似方法合成化合物5～12, 物理和光谱数据见表4 和表5。

　　1.3 化合物4a～12a 和4b～12b 的合成 (以4a 合成为例)

　　取1.98 g (4 mmol) 的化合物4 溶于乙腈, 加入0.53 g (4.8 mmol) 二甲胺盐酸盐、1.1 g (8 mmol)碳酸钾和0.88 g (8 mmol) 碘化钾, 加热回流 (80 ℃),反应2 h 后停止, 静置冷却。然后旋干溶剂, 用饱和碳酸氢钠溶液调节pH 到8～9 左右, 用二氯甲烷萃取3～4 次, 合并有机相, 旋干溶剂。剩余物经硅胶色谱柱 [洗脱剂为乙酸乙酯与石油醚 (含1% 的三乙胺), 体积比1∶1] 分离纯化得到棕色固体1.25 g。用类似方法合成化合物5a～12a 和4b～12b。

　　2 体外AChE 抑制试验

　　采用Ellman 分光光度法在体外考察化合物对电鳗乙酰胆碱酶的抑制作用, 同时用空白组, 利斯的明、多奈哌齐为阳性对照组进行实验。配置Tris 缓冲液pH 为7.2, 底物ACTI (碘化硫代乙酰胆碱) 的浓度为0.6 mmol稬1, 显色剂DTNB 的浓度为3 mmol稬1,电鳗AChE 总量为0.035 U, 抑制剂的配置浓度分别为1?105、1?106、1?107、1?108、1?109 mol稬1。分别取20 μL Tris 缓冲液、10 μL 电鳗AChE、10 μL各浓度的抑制剂于96 孔板中, 37 ℃下保温12 min, 然后加入10 μL 底物ACTI 和50 μL 的显色剂DTNB,5 min 后使用1420Victor 多标计数仪在405 nm 处读取每孔吸光度。空白组用10 μL Tris 缓冲液分别代替底物和抑制剂, 标准组用10 μL Tris 缓冲液代替抑制剂, 每个化合物在不同浓度均实验3 次, 然后以抑制率I (I = 100?(A 测A 空)/(A 标A 空)%) 对抑制剂浓度C作图, 进行S 型曲线线性拟合, 得到半数抑制率IC50对应的浓度Cx, 为了得到准确的IC50, 从1?105～1?109 mol稬1 中选择最接近Cx 的浓度1?10xmol稬1, 且1?10x mol稬1 小于Cx。配制1?10x、3?10x、5?10x、7?10x、9?10x mol稬1, 同法操作酶抑制实验, 然后以抑制率I 对抑制剂浓度C 作图,进行直线线性拟合, 求出IC50。

　　3 小结

　　合成的大部分的N-酰基硫色烯并噻唑-2-胺类化合物都有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性, 化合物10a 的生物活性是其中最好的, 其IC50 值达到了7.92μmol·L1, 活性优于对照药物利斯的明。这说明N-酰基硫色烯并噻唑-2-胺类化合物的结构值得进一步研究。